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ELISA板的基本使用流程

更新時(shí)間:2025-09-16    點(diǎn)擊次數(shù):326

  ELISA板的基本使用流程

  ELISA板(酶標(biāo)板)是ELISA實(shí)驗(yàn)的核心載體,其使用需遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作流程,主要包括以下步驟:

  板條拆裝與保存?

  使用可拆卸酶標(biāo)板時(shí),輕推底部拆下所需板條,剩余板條需密封后4℃保存(避免干燥失效)?。

  未使用的板條應(yīng)連同干燥劑放回鋁箔袋,密封保存于4℃冰箱?。

  樣本與標(biāo)準(zhǔn)品處理?

  樣本需離心(4℃, 1000g, 5分鐘)去除雜質(zhì),標(biāo)準(zhǔn)品需稀釋為梯度濃度(如1:2倍比稀釋)?。

  加樣時(shí)每孔100μL,懸空加入避免氣泡,不同濃度需更換槍頭?。

  孵育與洗滌?

  加樣后37℃避光孵育90分鐘,孵育時(shí)間需嚴(yán)格控制?。

  洗滌時(shí)每孔加入300μL洗滌液,浸泡30秒后拍干,重復(fù)3-5次以減少背景信號?。

  顯色與檢測?

  加入底物(如TMB)避光孵育15分鐘,終止反應(yīng)后立即用酶標(biāo)儀450nm檢測OD值?。

  關(guān)鍵注意事項(xiàng)

  封閉?:包被后需用BSA或脫脂奶粉封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),減少假陽性?。

  溫度控制?:孵育溫度需穩(wěn)定(37℃),避免溫度波動(dòng)影響結(jié)合效率?。

  洗滌?:洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致高背景值,建議使用洗板機(jī)或手動(dòng)拍干?。

  常見問題與優(yōu)化

  板條選擇?:優(yōu)先選用聚苯乙烯材質(zhì)微孔板,吸附性能穩(wěn)定且空白值低?。

  加樣技巧?:避免加在孔壁上部,防止液體殘留影響結(jié)果?。

  重復(fù)性?:建議設(shè)置復(fù)孔(至少3次重復(fù))以提高數(shù)據(jù)可靠性?。

  如需更詳細(xì)的視頻操作演示,可參考ELISA實(shí)驗(yàn)教程?。

  注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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